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加和規(guī)范色譜柱的管理延長使用壽命

點擊次數(shù):1898 發(fā)布時間:2019-05-17
     液相色譜法是20世紀(jì)70年代急劇發(fā)展起來的一項、快速的分離、分析技術(shù)。液相色譜法是指流動相為液相的色譜技術(shù),在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上,引入氣相色譜法理論,在技術(shù)上采用壓泵、固定相和靈敏度檢測器,實現(xiàn)了分析速度快、分析效率和操作自動化,它具有壓、速、、靈敏度等特點。
    它是用壓泵將具有不同性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑,緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,經(jīng)進樣閥注入供試品,由流動相帶入柱內(nèi),在柱內(nèi)各成分被分離后依次進入檢測器,色譜信號由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄。
    色譜柱是液相色譜的心臟,在液相色譜儀的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長柱子的使用壽命非常重要。
    色譜柱使用一段時間后就會出現(xiàn)柱壓升、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化,如不采取措施,將會縮短色譜柱的使用壽命,影響工作效率,并造成一定的經(jīng)濟損失。因此,有必要加和規(guī)范色譜柱的管理,從而延長色譜柱的使用壽命。
    影響色譜柱使用壽命的因素
    1 流動相
    在以水溶液為流動相時,水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長,當(dāng)用水溶液或有機酸緩沖液保護柱子時,一些霉菌可能在色譜柱中滋生,堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問世,目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um,流動相中的顆粒雜質(zhì)容易沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動相的pH值對色譜柱也有影響,是對化學(xué)鍵合硅膠填料,水溶液的pH***適范圍在2~7.5之間,當(dāng)pH>8時,硅膠會釋出生成絮狀物堵塞柱子,且難以復(fù)原,柱效快降低,甚至*失效。
    當(dāng)在緩沖液中加入有機溶劑例如甲醇或乙腈時,鹽類的溶解度下降,會析出鹽沉淀,堵塞柱子。同時流動相中的有機溶劑和鹽會腐蝕色譜柱頭的篩板,產(chǎn)生柱頭凹陷。流動相的性對柱子也有一定影響,對于硅膠柱,甲醇、水、冰乙酸等性較大物質(zhì)會破壞填料;反之,對于化學(xué)鍵合硅膠,性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱,而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。
    2 樣品和固定相
    如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動相中,在通過固定相會堵塞柱子,樣品中的顆粒雜質(zhì)也會堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過柱子時會產(chǎn)生不可逆吸附,這樣固定相的活性點被覆蓋。樣品組分還會與固定相產(chǎn)生反應(yīng),尤其是對于氨基柱的影響較為嚴(yán)重。因為氨基易與酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點,使保留時間縮短。色譜柱鍵合相基團脫落、固定相分解和活性基團變性以及會影響柱效和保留時間的顯著改變。大多數(shù)鍵合相都是通過硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上,形成帶有有機基團的固定相Si-O-Si-R(R為CnH2n+1),硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂,使鍵合基團脫落。
   

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